IDENTIFICAZIONE DEI GENI TARGET DEL miR-182 NELLA LINEA CELLULARE KASUMI-1, MODELLO DI LEUCEMIA MIELOIDE ACUTA (AML), E NELLE SUE SOTTOPOPOLAZIONI

La linea cellulare Kasumi-1 è un modello estesamente utilizzato per lo studio della leucemia mieloide acuta (AML). Il profilo di espressione dei microRNA della linea totale rispetto alle sue sottopopolazioni, separate tramite FACS, ha evidenziato significative differenze nel comparto CD34+ CD38- noto per ospitare le Leukaemia Initiating Cells (LICs). In particolare, i miR-182 e miR-584 sono risultati significativamente più espressi in questa sottopopolazione. Abbiamo selezionato attraverso la combinazione di approcci bioinformatici e di datamining 5 putativi geni target del miR-182 di cui FoxO1, FoxO3A, MITF, biologicamente validati e Smad4 e NPM1, non ancora validati. Per verificare la diminuita espressione di questi 5 geni nel comparto CD34+ CD38- rispetto alla linea Kasumi-1 e di quest’ultima rispetto ad una linea linfoblastoide di riferimento, abbiamo utilizzato real time PCR, western blot ed immunofluorescenza. In real time PCR, l’espressione di Smad4 appare significativamente diminuita nella sottopopolazione CD34+ CD38- rispetto alla linea totale. L’espressione di FoxO1 risulta, invece, significativamente diminuita nella linea Kasumi-1 rispetto alla linea di riferimento sia in real time PCR che in WB, mentre quella di FoxO3A solo in WB. Inoltre, da analisi di immunofluorescenza, la proteina FoxO1 è risultata colocalizzare a livello del nucleolo con NPM1, noto marcatore nucleolare. Il completamento di questo studio con esperimenti con precursore ed inibitore del miR-182 permetterà di verificare gli effetti sui livelli delle proteine considerate e il loro possibile contributo alla leuchemogenesi.