I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA non codificanti, che regolano l’espressione genica posttrascrizionale tramite interazione sequenza specifica con l’estremità 3’-UTR dell’mRNA bersaglio inibendo e/o bloccando la traduzione. Un singolo miRNA può regolare molti mRNA, e diversi miRNA possono regolare un solo bersaglio. Lo scopo di questo lavoro è quello di individuare alcuni miRNA espressi in monociti bovini CD14+ purificati da sangue intero attraverso l’utilizzo della tecnologia MACS (Miltenyi), in condizioni fisiologiche e dopo stimolazione con LPS (Gram -) e SEB (Gram+). Basandosi su precedenti studi in medicina umana, sono stati selezionati i miR-16 come controllo e i miR-125b, miR-155 (coinvolto nella risposta infiammatoria) miR-146a (regolatore negativo dell’immunità) e miR-223 come target. L’RNA totale è stato estratto mediante kit mirVana™ (Ambion), retrotrascritto con primer stem-loop specifici per ciascun miRNA e amplificato mediante PCR Real-Time con i corrispondenti MicroRNA TaqMan® Assay kit. I primer e le sonde TaqMan utilizzate, disegnate per l’uomo, sono state validate per il bovino. Ciascun target è stato quantificato mediante calcolo del ddCt verso il gene di controllo endogeno miR-16. I risultati ottenuti hanno confermato la presenza dei miRNA considerati nei monociti CD14+ e che tali miRNA sono differenzialmente espressi tra monociti controllo e stimolati. In particolare, miR-155 è sovraespresso in seguito a stimolazione con LPS, mentre con SEB i risultati hanno rivelato una down-regolazione del miR-125b e del miR-155.
Espressione di mirna in monociti bovini dopo stimolazione in vitro con challengers infiammatori / F. Dilda, G. Gioia, L.F. Pisani, L. Restelli, F. Albonico, V. Bronzo, M. Mortarino, P. Sartorelli, F. Ceciliani. - In: ATTI ... CONVEGNO NAZIONALE AIPVET. - ISSN 1825-2265. - 7:(2010 Jun), pp. 37-40. ((Intervento presentato al 7. convegno Congresso nazionale Associazione Italiana di Patologia Veterinaria tenutosi a Castelsardo (SS) nel 2010.
Espressione di mirna in monociti bovini dopo stimolazione in vitro con challengers infiammatori
F. DildaPrimo
;G. GioiaSecondo
;L.F. Pisani;L. Restelli;F. Albonico;V. Bronzo;M. Mortarino;P. SartorelliPenultimo
;F. CecilianiUltimo
2010
Abstract
I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA non codificanti, che regolano l’espressione genica posttrascrizionale tramite interazione sequenza specifica con l’estremità 3’-UTR dell’mRNA bersaglio inibendo e/o bloccando la traduzione. Un singolo miRNA può regolare molti mRNA, e diversi miRNA possono regolare un solo bersaglio. Lo scopo di questo lavoro è quello di individuare alcuni miRNA espressi in monociti bovini CD14+ purificati da sangue intero attraverso l’utilizzo della tecnologia MACS (Miltenyi), in condizioni fisiologiche e dopo stimolazione con LPS (Gram -) e SEB (Gram+). Basandosi su precedenti studi in medicina umana, sono stati selezionati i miR-16 come controllo e i miR-125b, miR-155 (coinvolto nella risposta infiammatoria) miR-146a (regolatore negativo dell’immunità) e miR-223 come target. L’RNA totale è stato estratto mediante kit mirVana™ (Ambion), retrotrascritto con primer stem-loop specifici per ciascun miRNA e amplificato mediante PCR Real-Time con i corrispondenti MicroRNA TaqMan® Assay kit. I primer e le sonde TaqMan utilizzate, disegnate per l’uomo, sono state validate per il bovino. Ciascun target è stato quantificato mediante calcolo del ddCt verso il gene di controllo endogeno miR-16. I risultati ottenuti hanno confermato la presenza dei miRNA considerati nei monociti CD14+ e che tali miRNA sono differenzialmente espressi tra monociti controllo e stimolati. In particolare, miR-155 è sovraespresso in seguito a stimolazione con LPS, mentre con SEB i risultati hanno rivelato una down-regolazione del miR-125b e del miR-155.Pubblicazioni consigliate
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