I microRNA (miRNA) sono piccoli RNA non codificanti, che regolano l’espressione genica posttrascrizionale tramite interazione sequenza specifica con l’estremità 3’-UTR dell’mRNA bersaglio inibendo e/o bloccando la traduzione. Un singolo miRNA può regolare molti mRNA, e diversi miRNA possono regolare un solo bersaglio. Lo scopo di questo lavoro è quello di individuare alcuni miRNA espressi in monociti bovini CD14+ purificati da sangue intero attraverso l’utilizzo della tecnologia MACS (Miltenyi), in condizioni fisiologiche e dopo stimolazione con LPS (Gram -) e SEB (Gram+). Basandosi su precedenti studi in medicina umana, sono stati selezionati i miR-16 come controllo e i miR-125b, miR-155 (coinvolto nella risposta infiammatoria) miR-146a (regolatore negativo dell’immunità) e miR-223 come target. L’RNA totale è stato estratto mediante kit mirVana™ (Ambion), retrotrascritto con primer stem-loop specifici per ciascun miRNA e amplificato mediante PCR Real-Time con i corrispondenti MicroRNA TaqMan® Assay kit. I primer e le sonde TaqMan utilizzate, disegnate per l’uomo, sono state validate per il bovino. Ciascun target è stato quantificato mediante calcolo del ddCt verso il gene di controllo endogeno miR-16. I risultati ottenuti hanno confermato la presenza dei miRNA considerati nei monociti CD14+ e che tali miRNA sono differenzialmente espressi tra monociti controllo e stimolati. In particolare, miR-155 è sovraespresso in seguito a stimolazione con LPS, mentre con SEB i risultati hanno rivelato una down-regolazione del miR-125b e del miR-155.
Espressione di mirna in monociti bovini dopo stimolazione in vitro con challengers infiammatori / F. Dilda, G. Gioia, L.F. Pisani, L. Restelli, F. Albonico, V. Bronzo, M. Mortarino, P. Sartorelli, F. Ceciliani. - 7(2010 Jun), pp. 37-40. ((Intervento presentato al 7. convegno Congresso nazionale Associazione Italiana di Patologia Veterinaria tenutosi a Castelsardo (SS) nel 2010.
Titolo: | Espressione di mirna in monociti bovini dopo stimolazione in vitro con challengers infiammatori |
Autori: | DILDA, FRANCESCA (Primo) GIOIA, GLORIA (Secondo) SARTORELLI, PAOLA (Penultimo) CECILIANI, FABRIZIO (Ultimo) |
Parole Chiave: | miRNA ; monociti CD14+ ; bovino |
Settore Scientifico Disciplinare: | Settore VET/03 - Patologia Generale e Anatomia Patologica Veterinaria Settore VET/05 - Malattie Infettive degli Animali Domestici Settore VET/06 - Parassitologia e Malattie Parassitarie degli Animali |
Data di pubblicazione: | giu-2010 |
Rivista: | |
Enti collegati al convegno: | Associazione Italiana di Patologia Veterinaria |
Tipologia: | Article (author) |
Appare nelle tipologie: | 01 - Articolo su periodico |