Studi funzionali nel coniglio in vivo hanno fornito prove indirette di un riassorbimento di liquido dal cavo pleurico al seguito di trasporto attivo transmesoteliale di soluti; questo processo sembrerebbe realizzarsi grazie alla ATPasi Na+/K+ basolaterale e ad un doppio scambio Na+/H+-Cl-/HCO3- (Agostoni E, Zocchi L, Respir Physiol 92:101, 1993) e un cotrasporto Na+-glucosio (Zocchi L et al, Exper Physiol 81: 957, 1996) della membrana apicale. Lo scopo di questa ricerca è stato quello di determinare a livello molecolare la presenza del cotrasporto Na+-glucosio (isoforma SGLT1) nel mesotelio pleurico di varie specie animali mediante immunoblotting su proteine estratte da linee cellulari di mesotelio pleurico di ratto e uomo, e da cellule prelevate (scraping) da pleura parietale e viscerale di coniglio e pecora. Inoltre, si sono eseguiti esperimenti di immunofluorescenza su campioni di pleura parietale e viscerale di pecora. Tutti i saggi di western blot hanno evidenziato la presenza di bande all’altezza attesa per SGLT1; i segnali sono specifici, in quanto silenziati in esperimenti paralleli in cui l’anticorpo primario veniva preadsorbito con un eccesso di peptide di controllo. L’immunofuorescenza ha dimostrato la localizzazione di SGLT1 sulla membrana apicale del mesotelio di pecora. In conclusione, si è documentata in modo diretto l’espressione di SGLT1 nel mesotelio pleurico di tutte le specie esaminate, e la sua localizzazione apicale nella pecora. Ciò conferma le indicazioni degli studi funzionali nel coniglio e avvalora l’ipotesi secondo cui la rimozione di liquido pleurico può avvenire anche come conseguenza di un riassorbimento di soluti. Il liquido così trasportato attraverso il mesotelio può essere assorbito nei capillari della pleura viscerale anche nelle specie a pleura spessa (pecora, uomo), nelle quali la distanza dei capillari dal mesotelio è relativamente grande.
Espressione del cotrasportatore Na+-glucosio nel mesotelio pleurico / M. Armilli, C. Sironi, F. Bodega, C. Porta, L. Zocchi, E. Agostoni. ((Intervento presentato al 2. convegno Riunione nazionale dei dottorandi di fisiologia tenutosi a Bertinoro nel 2008.
Espressione del cotrasportatore Na+-glucosio nel mesotelio pleurico
M. ArmilliPrimo
;C. SironiSecondo
;F. Bodega;C. Porta;L. ZocchiPenultimo
;E. AgostoniUltimo
2008
Abstract
Studi funzionali nel coniglio in vivo hanno fornito prove indirette di un riassorbimento di liquido dal cavo pleurico al seguito di trasporto attivo transmesoteliale di soluti; questo processo sembrerebbe realizzarsi grazie alla ATPasi Na+/K+ basolaterale e ad un doppio scambio Na+/H+-Cl-/HCO3- (Agostoni E, Zocchi L, Respir Physiol 92:101, 1993) e un cotrasporto Na+-glucosio (Zocchi L et al, Exper Physiol 81: 957, 1996) della membrana apicale. Lo scopo di questa ricerca è stato quello di determinare a livello molecolare la presenza del cotrasporto Na+-glucosio (isoforma SGLT1) nel mesotelio pleurico di varie specie animali mediante immunoblotting su proteine estratte da linee cellulari di mesotelio pleurico di ratto e uomo, e da cellule prelevate (scraping) da pleura parietale e viscerale di coniglio e pecora. Inoltre, si sono eseguiti esperimenti di immunofluorescenza su campioni di pleura parietale e viscerale di pecora. Tutti i saggi di western blot hanno evidenziato la presenza di bande all’altezza attesa per SGLT1; i segnali sono specifici, in quanto silenziati in esperimenti paralleli in cui l’anticorpo primario veniva preadsorbito con un eccesso di peptide di controllo. L’immunofuorescenza ha dimostrato la localizzazione di SGLT1 sulla membrana apicale del mesotelio di pecora. In conclusione, si è documentata in modo diretto l’espressione di SGLT1 nel mesotelio pleurico di tutte le specie esaminate, e la sua localizzazione apicale nella pecora. Ciò conferma le indicazioni degli studi funzionali nel coniglio e avvalora l’ipotesi secondo cui la rimozione di liquido pleurico può avvenire anche come conseguenza di un riassorbimento di soluti. Il liquido così trasportato attraverso il mesotelio può essere assorbito nei capillari della pleura viscerale anche nelle specie a pleura spessa (pecora, uomo), nelle quali la distanza dei capillari dal mesotelio è relativamente grande.Pubblicazioni consigliate
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