PCR multiplex con frammenti a basso peso molecolare nell’analisi di DNA altamente degradato

Sempre più frequente è la necessità di effettuare analisi genetiche a fini identificativi su materiali particolarmente degradati quali ossa, denti o tessuti inclusi in paraffina. Molto spesso il DNA è così degradato che i kit commerciali di comune impiego dimostrano limitate capacità discriminative per via del peso molecolare relativamente elevato di alcuni marcatori particolarmente informativi, quali ad es. FGA, D2S1338, D18S51. Si è allora inteso verificare l’utilità di due kit commerciali di produzione tedesca (Mentype® Nonaplex II e Mentype® Argus S) che hanno la particolarità di combinare elevata informatività (è incluso il marcatore SE33 nel kit Nonaplex II) con un range ridotto di peso molecolare dei prodotti amplificati grazie ad una specifica scelta di primers. Eseguiti i preliminari test di validazione all’uso nelle nostre condizioni sperimentali, i due kit sono stati impiegati su DNA estratto da tessuto incluso in paraffina in un caso di paternità controversa in cui il DNA era particolarmente degradato tanto che solo 3 marcatori del kit SGM PlusTM Applied Biosystems (quelli a minore peso molecolare) avevano fornito risultato inequivocabile. Il ridotto peso molecolare dei frammenti amplificati con i due kit Mentype® Nonaplex II e Mentype® Argus S ha consentito di ottenere risultati riproducibili per complessivi 6 marcatori, consentendo così di raggiungere un buon grado di informatività e di contribuire efficacemente alla soluzione del caso di paternità controversa.