Aspergillus fumigatus è in genere sensibile agli antifungini, tuttavia negli ultimi anni con sempre maggiore frequenza viene segnalata resistenza agli azoli, sia intrinseca che acquisita a seguito di trattamento cronico. La resistenza è per lo più associata ad alterazione in cyp51A, gene che codifica l’enzima target degli azoli, e i codoni 54, 98 e 220 sono quelli più frequentemente coinvolti nella mutazione. In Olanda e in altri Paesi europei l’emergenza di multiresistenza ai triazoli in ceppi clinici è stata associata alla comparsa del meccanismo di resistenza TR/L98H. Obiettivo del presente lavoro è stato quello di ricercare il meccanismo di resistenza TR/L98H in ceppi clinici di A. fumigatus resistenti agli azoli, isolati in Lombardia. I saggi di sensibilità in vitro a itraconazolo, voriconazolo e posaconazolo sono stati effettuati secondo due metodiche, microdiluizione in brodo (EUCAST) ed E-test. Per la ricerca del meccanismo di resistenza TR/L98H è stata effettuata amplificazione mediante PCR e sequenziamento di una parte della regione codificante e del promotore del gene cyp51A. Le sequenze ottenute sono state analizzate per individuare la mutazione puntiforme T364A alla base della sostituzione aminoacidica L98H e il tandem di 34 paia di basi ripetute nel promotore (tandem repeat, TR). Dei sei ceppi resistenti a itraconazolo (MIC >32mg/L) studiati, 3 sono risultati resistenti anche a posaconazolo (MIC >0.25mg/L) e due con una ridotta sensibilità a voriconazolo (MIC ≥2mg/L). Il meccanismo di resistenza TR/L98H è stato riscontrato in 5 dei 6 ceppi resistenti. In un ceppo resistente a itraconazolo e posaconazolo non è stata rilevata la sostituzione L98H, ma la sostituzione di una guanina con una adenina in posizione 161 all’interno del gene cyp51A. (mutazione puntiforme G161A) I sei ceppi erano stati isolati dalle secrezioni respiratorie di sei differenti pazienti: tre bambini affetti da fibrosi cistica, di cui due in trattamento da oltre un anno con voriconazolo o itraconazolo, un paziente con broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO) in trattamento cronico con voriconazolo e due soggetti non sottoposti a terapia antifungina. La mutazione puntiforme G161A era presente nel ceppo isolato dal paziente con BPCO. Dai risultati di questo studio emerge che anche in Italia sono presenti ceppi clinici di A. fumigatus resistenti ai triazoli e che, nella maggior parte dei casi, il fenotipo e il meccanismo di resistenza sono identici a

RESISTENZA AI TRIAZOLI IN ISOLATI CLINICI DI ASPERGILLUS FUMIGATUS IN LOMBARDIA / A. Grancini, A. Prigitano, M.C. Esposto, M. Cogliati, A. Biffi, D. Legnani, A.M. Tortorano. ((Intervento presentato al 7. convegno CONVEGNO NAZIONALE DI.T.M.O. tenutosi a GENOVA nel 2013.

RESISTENZA AI TRIAZOLI IN ISOLATI CLINICI DI ASPERGILLUS FUMIGATUS IN LOMBARDIA

A. Prigitano;M.C. Esposto;M. Cogliati;D. Legnani
Penultimo
;
A.M. Tortorano
2013

Abstract

Aspergillus fumigatus è in genere sensibile agli antifungini, tuttavia negli ultimi anni con sempre maggiore frequenza viene segnalata resistenza agli azoli, sia intrinseca che acquisita a seguito di trattamento cronico. La resistenza è per lo più associata ad alterazione in cyp51A, gene che codifica l’enzima target degli azoli, e i codoni 54, 98 e 220 sono quelli più frequentemente coinvolti nella mutazione. In Olanda e in altri Paesi europei l’emergenza di multiresistenza ai triazoli in ceppi clinici è stata associata alla comparsa del meccanismo di resistenza TR/L98H. Obiettivo del presente lavoro è stato quello di ricercare il meccanismo di resistenza TR/L98H in ceppi clinici di A. fumigatus resistenti agli azoli, isolati in Lombardia. I saggi di sensibilità in vitro a itraconazolo, voriconazolo e posaconazolo sono stati effettuati secondo due metodiche, microdiluizione in brodo (EUCAST) ed E-test. Per la ricerca del meccanismo di resistenza TR/L98H è stata effettuata amplificazione mediante PCR e sequenziamento di una parte della regione codificante e del promotore del gene cyp51A. Le sequenze ottenute sono state analizzate per individuare la mutazione puntiforme T364A alla base della sostituzione aminoacidica L98H e il tandem di 34 paia di basi ripetute nel promotore (tandem repeat, TR). Dei sei ceppi resistenti a itraconazolo (MIC >32mg/L) studiati, 3 sono risultati resistenti anche a posaconazolo (MIC >0.25mg/L) e due con una ridotta sensibilità a voriconazolo (MIC ≥2mg/L). Il meccanismo di resistenza TR/L98H è stato riscontrato in 5 dei 6 ceppi resistenti. In un ceppo resistente a itraconazolo e posaconazolo non è stata rilevata la sostituzione L98H, ma la sostituzione di una guanina con una adenina in posizione 161 all’interno del gene cyp51A. (mutazione puntiforme G161A) I sei ceppi erano stati isolati dalle secrezioni respiratorie di sei differenti pazienti: tre bambini affetti da fibrosi cistica, di cui due in trattamento da oltre un anno con voriconazolo o itraconazolo, un paziente con broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO) in trattamento cronico con voriconazolo e due soggetti non sottoposti a terapia antifungina. La mutazione puntiforme G161A era presente nel ceppo isolato dal paziente con BPCO. Dai risultati di questo studio emerge che anche in Italia sono presenti ceppi clinici di A. fumigatus resistenti ai triazoli e che, nella maggior parte dei casi, il fenotipo e il meccanismo di resistenza sono identici a
20-giu-2013
Settore MED/42 - Igiene Generale e Applicata
Settore MED/17 - Malattie Infettive
RESISTENZA AI TRIAZOLI IN ISOLATI CLINICI DI ASPERGILLUS FUMIGATUS IN LOMBARDIA / A. Grancini, A. Prigitano, M.C. Esposto, M. Cogliati, A. Biffi, D. Legnani, A.M. Tortorano. ((Intervento presentato al 7. convegno CONVEGNO NAZIONALE DI.T.M.O. tenutosi a GENOVA nel 2013.
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