Microelettroforesi e caratteristiche elettrofisiologiche di membrane cellulari

Microelettroforesi e caratteristiche elettrofisiologiche di membrane cellulari. Negli ultimi anni particolare attenzione è stata posta alle relazioni tra funzione delle membrane, le loro proprietà chimico-fisiche e la composizione in acidi grassi, prevalentemente della frazione fosfolipidica considerato il fatto che i fosfolipidi, trovati nelle membrane biologiche, derivano le loro proprietà idrofobiche dagli acidi grassi costituenti. Le correlazioni più frequentemente analizzate sono quelle tra i componenti di membrana e i loro acidi grassi modificati, in vivo, da alterazioni della composizione lipidica della dieta o, in vitro, mediante opportune modifiche del mezzo di coltura. Considerate le differenze precedentemente trovate nelle caratteristiche elettriche di cellule HT-29 (linea cellulare stabile di adenocarcinoma di colon umano), cresciute in presenza od in assenza di PAF, si è analizzata la composizione di membrana correlandola alle proprietà termotropiche al fine di isolare i componenti responsabili (oltre al colesterolo) di variazioni della fluidità di membrana. Scopi di questo studio sono stati quindi: l) l'analisi della composizione delle miscele di fosfolipidi estratti dalle membrane, 2) la valutazione delle correlazioni tra composizione e proprietà termotropiche delle miscele. Al fine di disporre di quantità rilevanti di materiale biologico si sono utilizzati eritrociti bovini realizzando una "banca" di campioni di miscele lipidiche ottenute, in vivo, con alterazione della dieta degli animali. I lipidi totali sono stati estratti dalle membrane cellulari con miscele di cloroformio/metanolo in diversi rapporti e le miscele lipidiche sono state frazionate mediante cromatografia su colonna. Le singole specie fosfolipidiche sono state separate in HPTLC e quantificate mediante densitometria a scansione. La composizione in acidi grassi dei fosfolipidi di membrana è stata valutata mediante gas-liquido cromatografia e dispersioni acquose tamponate sono state esaminate mediante calorimetria differenziale a scansione. Per ogni campione è stato calcolato il contenuto di acidi grassi saturi (S), insaturi (U) e l'indice di insaturazione (UI). I principali acidi grassi presenti (mediamente: >= 10% in peso) sono risultati: C16:0, C18:0, C18:1. C18:2 e C24:0. Le miscele di fosfolipidi mostrano una o due transizioni di fase a temperature comprese tra 17.7 e 40.0 ºC. La prima temperatura di transizione è compresa tra 17.7 e 26.0 °C. UI e U/S non risultano essere correlati al contenuto percentuale delle diverse specie molecolari di fosfolipidi (PC, PE, SM, PS+PI) e di PC+SM, costituenti principali del foglietto esterno del doppio strato lipidico. Esiste, invece, una correlazione lineare tra la prima temperatura di transizione ed UI (P<0.05) e U/S (P<0.01). La prima temperatura di transizione diminuisce all'aumentare di UI o del rapporto U/S.